测定吴茱萸醇提物中4种生物碱的过程分析

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸、石虎或疏毛吴茱萸的 干燥近成熟果实。吴茱萸性味辛、苦、热，有小毒; 具 有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻等功效。现代研究表 明，吴茱萸中含有多种化学成分，主要为生物碱类、柠檬 苦素类、挥发油类、木脂素、黄酮、多糖等，其中生物碱 类为其主要有效成分，具有镇痛、抗炎等药理作用。

Agilent 1260 series 高效液相色谱仪( 包括 四元泵、自动进样器、柱温箱、DAD 检测器) ; Mettler AE 240 电子天平( 瑞士 Mettler 公司，感量: 0．000 1 g) ;PS-80A 超声波清洗机( 东莞市洁康超声波设备有限公司) ; GZX-9140MBE 电热鼓风干燥箱( 上海博迅实业有限公司医疗设备厂) ; 116B 摇摆式高速中药粉碎机 ( 瑞安市永历制药机械有限公司) 。

吴茱萸药材采自江西省新干市，经江西中 医药大学曹岚副教授鉴定为芸香科植物石虎的 干燥近成熟果实。去氢吴茱萸碱对照品购自上海源叶 生物科技有限公司( 批号: B21028) ，吴茱萸新碱对照品 购自上海胤珂生物科技有限公司( 批号: 15266-38-3) ，吴 茱萸碱对照品( 批号: 110802-200504) 、吴茱萸次碱对照 品( 批号: 0801-9702) 购自中国食品药品检定研究院。 所有对照品标示含量均大于 98．5%( HPLC 分析) 。乙 腈为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

精密称取各对照品适量，以 甲醇溶解并定容，得单一成分对照品溶液。再分别取上 述 4 个对照品溶液各 1 mL 加入 10 mL 量瓶中，以甲醇 定容，摇匀，得混合对照品储备溶液。混标溶液中，各对 照品的浓度分别为: 去氢吴茱萸碱 503 μg·mL－1 、吴茱 萸碱 501 μg·mL－1 、吴茱萸次碱 503 μg·mL－1 和吴茱萸 新碱 511 μg·mL－1 。吴茱萸药材净制，放入60 ℃ 烘箱，烘 2 h，粉碎，称取约 0．3 g( 过孔径 355 μm 筛) ，置 于具塞锥形瓶中，精密加入 70%乙醇 25mL，称定质量， 浸泡 1 h 后超声处理( 功率 100 W，频率 40 kHz) 40 min， 放冷，再称定质量，用 70%乙醇补足减失的质量，摇匀， 滤过，取续滤液，过孔径 0．22 μm 滤膜，备用。将混合对照品 溶液、供试品溶液和空白溶剂分别按照“2．3”项下色谱 条件分别进样检测。可知，空白溶剂在 去氢吴茱萸碱峰、吴茱萸碱峰、吴茱萸次碱峰和吴茱萸 新碱峰位置处均无吸收峰，即溶剂对测定无干扰; 供试 品溶液中，4 种组分峰均与其他组分峰达到基线分离， 分离度＞1．5，且与混合对照品溶液中 4 种组分峰的保 留时间一致。精密吸取供试品溶液 5 μL，按 “2．3”项下色谱条件连续进样 6 针，以峰面积计算 ＲSD 值，得去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、吴茱萸新 碱的 ＲSD 值分别为 0．7%，0．6%，0．5%，0．8%。

本实验考察乙腈-0． 2%甲酸溶 液、乙腈-0．2%醋酸溶液和乙腈-0．1%磷酸溶液，发现在 乙腈-0．1%磷酸溶液下 4 种成分的色谱峰分离效果较 好，可达到完全分离，且出峰时间适中。因此选用了乙 腈-0．1%磷酸溶液为本实验的流动相。吴茱萸生物碱是脂溶性化合 物，易溶于有机溶剂，如乙醇、甲醇、乙酸乙酯溶液等。 从环境友好和经济适用的角度看，乙醇是最佳的提取 溶剂。前期实验表明吴茱萸生物碱进行提取用浓 度为 70%的乙醇，生物碱得率最高。因此，本实验使 用的提取溶剂为 70%乙醇。



 

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