纤维细胞增殖分析

1 材料与方法 

1.1 细胞株与药物 

人胚胎皮肤成纤维细胞株（CCC-ESF-1，编号 ： BNCC339675）购自北京北纳创联生物技术研究院， 美洲大蠊提取物（乙醇提取）Ento-A（黄褐色浓稠 膏状）、Ento-B、Ento-C 和 Ento-D（褐色浓稠膏状）、 Ento-E（ 黄 褐 色 冻 干 粉 末 ）、Ento-F（ 褐 色 液 体 ） 为云南省昆虫生物医药研发重点实验室自制。 

1.2 试剂与耗材 

H-DMEM 培养基（美国 Gibco 公司），碳酸氢钠 （NaHCO3）、Hepes（北京索莱宝科技有限公司），胎 牛血清（美国 Gibco 公司），0.25% 胰蛋白酶（美国 Millipore 公司），噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DMSO） （ 美 国 Sigma 公 司 ）， 双 抗 青 链 霉 素 混 合 液（ 美 国 Millipore 公司），磷酸盐缓冲液（PBS）（美国 Hyclone 公司）。 

1.3 仪器 

低速离心机（SC-2546）（安徽中科中佳科学仪 器有限公司），多功能酶标仪（Spectra Max M2）（美国 Molecular Devices 公司），立式压力蒸汽灭菌器（YXQ-LS-50SII）（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），电热 恒温水浴锅（HWS-12 型）（上海一恒科技有限公司）， 水套式二氧化碳培养箱（美国 Thermo 公司），洁净工 作台（SW-CJ-1FD）（苏净集团苏州安泰空气技术有 限公司），冰箱（BCD-232MB/A）（广东容声电器股份 有限公司），立式超低温保存箱（DW-86L386）（青岛 海尔股份有限公司）。

2 结果

低倍光学电子显微镜下观察可见，阴性对照组 CCC-ESF-1 细胞似长梭形或三角形，生长状态良好。 30 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-C 作用细胞 24 h 后，细 胞状态较阴性对照组无变化。3 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-B、Ento-E 和 300 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-F 分别作用细胞 24 h 后，与阴性对照组比较，细胞数有少 量减少，细胞形态有皱缩，发生变形，三者细胞状态相 似。10 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-D 作用细胞 24 h 后， 细胞数有一定减少，细胞形态皱缩，间隙变大，棱角变 钝，散布存在。3 μg/ml 美洲大蠊提取物 Ento-A 作用 细胞 24 h 后，细胞数变少明显，细胞形态变短，细胞纤 维样逐渐消失，甚至可以看到漂浮的细胞。

3 讨论 

瘢痕形成和创面愈合机制是一个相当复杂的生物 学过程，其机制尚未完全清楚，一般认为增生性瘢痕的 成因来源于成纤维细胞的生物学特性异常，由于成纤 维细胞增殖、生长失控，胶原过度沉积导致真皮纤维 化。增生性瘢痕的治疗方法有中药疗法、抗肿瘤药治疗、 手术治疗、压力治疗、放射治疗、激光治疗、基因治 疗等，目前尚无特效的治疗方法。尽管增生性瘢痕属 于良性病变，但由于影响体表美观，关节部位的瘢 痕还可影响关节活动，降低生活质量，易复发，因此是 目前临床上亟待解决的课题。

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