己酸菌的分离筛选分析（博迅MJX-250C使用）

1 材料与方法 

1.1 材料与试剂

老窖泥（1# 、2# 、3# ）：某老酒厂优质大曲酒发酵池乙醇醋酸钠培养基：乙酸钠0.5%，磷酸氢二钾0.04%， 硫酸镁0.02%，硫酸铵0.05%，酵母膏0.1%，调节pH至7.0，121 ℃高压蒸气灭菌20 min，接种前加入无水乙醇2%。

1.2 仪器与设备 

SW-CJ-ZFD双人单面洁净工作台：苏州苏洁净化设备 有限公司；MJX-250C立式恒温培养箱：上海博迅实业有限公司医疗设备有限公司；LDZX-75KB立式压力蒸汽灭菌 锅：上海申安医疗器械厂；ALC-1104电子天平：赛多利斯科 学仪器有限公司；Agilent 6820气相色谱（gas chromatography， GC）仪：美国安捷伦公司；DHG-9071A电热恒温干燥箱：上 海精宏实验设备有限公司；722E可见分光光度计：上海光 谱仪器有限公司；LEICA电子显微镜：德国LEICA公司；DK98-II双列八孔电热恒温水浴锅：天津市泰斯特有限公司； C1000 Touch聚合酶链式反应（polymerase chain reaction， PCR）仪：美国伯乐公司。

2 结果与分析

随着发酵温度的升高，菌株A-3的己酸含量呈先升高后下降 的趋势。当发酵温度为37 ℃时，己酸含量最高，为8.17 g/L。 当发酵温度低于11 ℃或高于57 ℃时，则几乎不产己酸，故 最适发酵温度为37 ℃，温度耐受范围为13～55 ℃。

3 结论 

通过对老窖泥的多次富集培养，从3# 老窖泥中筛选得 到3株高产己酸的菌株A-1、A-3和A-5，己酸产量分别为 5.73 g/L、9.77 g/L、7.45 g/L。通过形态观察及分子生物学技 术鉴定3株菌株均为克鲁维氏梭菌（Clostridium kluyveri）。 其中Clostridium kluyveri A-3己酸产量最高，对其发酵性能 进行测定。结果表明，Clostridium kluyveri A-3在22 h后进入 对数期，80 h后进入稳定期，其产己酸的最佳初始pH值为 7.0，发酵时间为14 d，发酵温度为37 ℃，乙醇含量为2%，pH 耐受范围为3.0～11.0，乙醇最高耐受含量为5%，温度耐受 范围为13～55 ℃。

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