骨骼肌组织中Myf5的表达分析-灭菌器的应用

肌源性因子 5（Myogenic factor 5，Myf5）是肌源 性调节因子家族成员，是骨骼肌调节基因 ，负责脊 椎动物胚胎的骨骼肌生成 ，在骨骼肌形成初期对 肌原细胞增殖分化起主要作用 ，与肌原性分化密 切相关 。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

共选取 16 只健康小鼠，即幼龄 小鼠（7 日龄）、性成熟小鼠（21～28 日龄）、体成熟 小鼠（42～56 日龄）和老龄小鼠（84 日龄以上）各 4 只，均由山西农业大学试验动物中心提供。

1.1.2 主要试剂与仪器

氯仿、异丙醇、无水乙醇 （天津天大化工）、RNAiso Plus、PrimeScript TMRTreagent Kit（Perfect Real Time）、SYBR Premix Ex Tap（Takara）、 Myf5 抗体（三鹰）、β-actin（三鹰）等；立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅BXM-30R）；光学显微镜（Leica 公司）、普通 MYF5 仪（Bio-Rad 公司）、Mx3000P 实时荧光定量 PCR 仪及相应的检测软件（Agilent）、高速冷冻离心 机（Sigma 公司）、凝胶成像仪（Panasonic 公司）、超 净工作台（SW-CJ-CO 型，苏州市华宇净化设备有 限公司）。

1.2 方法

1.2.1 取材

通过断颈使小鼠安乐死，将小鼠用 70%酒精彻底喷洒（以防止小鼠皮毛污染），用镊子 拾起腹部皮肤，然后用锋利的剪刀做一个纵向切 口，沿相反方向剥去皮肤，沿胫骨两侧插入和延伸 剪刀，切除腓肠肌，分为 2 份，一份快速放入液氮速 冻，一份放入固定液固定。

1.2.2 引物设计与合成

试验所用引物均根据 GenBank Myf5 基因对应（登录号：17877）的小鼠序 列，采用 Premier 5.0 软件进行实时荧光 PCR 引物 设计，由北京华大公司合成（表 1）。

2 结果与分析

幼龄小鼠的细胞核多位于细 胞边缘，肌纤维的横切面近似圆形；性成熟、体成熟 小鼠的肌纤维多排列致密，呈簇排列，胞核多位于 周边，肌纤维的横切面近似多边形；老龄小鼠肌纤 维排列松散，肌束间间隙增大。表明从幼龄到体成 熟阶段，随着年龄的不断增加，肌纤维在不断生长， 肌纤维的直径不断增加，肌纤维的横切面由近似圆形逐渐变为多边形，肌束排列更加紧密；而在老龄 阶段，肌束间的间隙逐渐增大。阳性组和阴性组明显不同，阴性 组细胞核呈现蓝色，胞质为淡粉色。表明 Myf5 的表 达定位于细胞核中，Myf5 在幼年、体成熟、性成熟、 老年小鼠的 4 个不同发育阶段的骨骼肌中均有表 达，且免疫组织化学结构染色深浅不一，阳性组幼 龄阶段着色较深。表明 Myf5 在幼年阶段的表达量 较多，而在性成熟、体成熟、老年阶段的表达量相对 较少。

3 结论与讨论

肌源性因子 5 是一种人体内由 Myf5 基因编码 的蛋白质，在调节肌肉分化或肌生成，特别是骨 骼肌的发育中发挥关键作用 。Myf5 在肌源性分 化中起着重要作用。此外，Myf5 是肌肉发育的主要 调控因子，在成纤维细胞中表达时，具有诱导肌肉 表型的能力。研究发现，Myf5 在早期体细胞的皮 肌组中表达，能促使肌源性前体分化为成肌细胞 ，肌生成方面发挥作用的同时，也间接控制了近端肋 骨的发育与骨骼肌再生 。Myf5 是卫星细胞的关 键细胞标志物之一，在肌肉损伤再生中起着重要作用，当肌肉发生损伤时，处于静止状态的卫星细 胞被激活，通过增殖、分化后重新形成新的骨骼肌 细胞，从而实现骨骼肌损伤修复 。