博迅浅谈薰衣草提取物的作用

阿尔茨海默病俗 称早老性痴呆症，是发生于老年和老年前期以进 行性神经退化为特征的中枢神经系统变行性疾 病，是大脑退行性病变，其主要临床表现为认知功 能减退并伴有行为障碍和情绪异常等，严重者甚 至失去生活自理能力。随着 我 国 人 口 老 龄 化 进程的加快，ＡＤ发病率呈不断上升的趋势，严重 威胁老年人的生命健康。ＡＤ 的发病机制十分复 杂，目前多方面研究表明，ＡＤ 患者大脑内神经递 质－乙酰胆碱的缺失是导致 ＡＤ 疾病的关键原因，AＤ的病理与患者神经间隙中乙酰胆碱酯酶活性过高具有重要关系。

乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ，Ｓｉｇｍａ 公司），碘 化 乙 酰 硫 代 胆 碱 （ＡＴＣＩ，Ａｌａｄｄｉｎ 公 司），５，５’－二 硫 代 双 （２－硝 基 苯 甲 酸）（ＤＴＮＢ， Ａｌａｄｄｉｎ公司），石杉 碱 甲（ｈｕｐｅｒｚｉｎｅＡ，Ａｌａｄｄｉｎ 公司），二甲基亚砜（ＤＭＳＯ，ＧＲ，天津市北联精细 化学品开发有限公司），磷酸二氢钠（ＡＲ，天津市 致远化学试剂有限公司），磷酸氢二钠（ＡＲ，天津 市致远化学试剂有限公司），没食子酸（ＡＲ，成都 市新都区木兰镇工业开发区），无水碳酸钠（ＡＲ， 上海试四赫维化工有限公司），福林酚试剂（ＡＲ， 天津市光复精细化工研究所）；其余化学试剂均为 国产分析纯，实验用水为去离子水；薰衣草（由伊 犁紫苏丽人有限责任公司提供，经新疆分析测试 研究院阿依古丽副研究员鉴定确认）。

酶标仪Ｉ３Ｘ（ＭＤ 公司），制备 液相色谱仪（日本岛津公司），碎样机（北京开创同和科技发展有限公司），电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司），电热恒温水浴锅（上海博迅实业有限公司），冷却水循环机（莱博科泰公司），实验 室冷冻干 燥 机（德 国 ＣＨＲＩＳＴ），分析 天 平（梅 特 勒－托利多），联用型平行蒸发仪（ＢＵＣＨＩ），紫外分光光度计 ＵＶ－２７００（日本岛津公司），超纯水系 统（美国密理特公司），酶标板（Ｃｏｓｔａｒ公司）。

取薰衣草干花适 量，用碎样机粉碎，过筛，保存备用。称取 粉 碎 后 样品于锥形瓶，加入７０％的乙醇（料液比１∶１０）， ８０℃回流提取１ｈ，过滤，重复提取２次，合并２次 滤液，减压浓缩至无醇味，过聚酰胺柱，减压浓缩 后冻干，称重；将冻干的过完聚酰胺柱的组分溶解 后过 ＨＰ２０树脂 柱，收 集 洗 脱 液，减 压 浓 缩 后 冻 干，称重，取该提取物加甲醇超声溶解，进制备液 相，按时间收集，得３０个组分，减压浓缩后冻干， 称重；配置１ｍｇ·ｍＬ－１溶液，放于４℃冰箱保存备 用，作为进行乙酰胆碱酯酶活性测定的样品溶液。

标准曲 线制备：各取不同浓度的没食子酸标准液０．５ｍＬ 于１０ｍＬ比色管中，加入５ｍＬ１０％的福林酚试 剂，加入３ｍＬ１０％碳酸钠溶液，充 分 混 匀，室 温 避光反应９０ｍｉｎ；在７６５ｎｍ 处测定吸光度值，以 吸光度值（Ａ）为纵坐标，以浓度（Ｃ）为横坐标，绘 制标准曲线。 样品 测 定：取 待 测 样 品 溶 液 ０．５ ｍＬ，加 入 ５ｍＬ１０％的福林酚试剂，加入３ｍＬ１０％碳酸钠 溶液，混匀，室温 避 光 反 应９０ｍｉｎ；在７６５ｎｍ 处 测定吸光度值。

性研究 参 考 文 献方 法，在 ９６ 孔 板 中 加 人１６０μＬ０．１ｍｏｌ·Ｌ－１ ＰＢ 缓冲 液（ｐＨ７．４），１０μＬ １Ｕ·ｍＬ－１ ＡＣｈＥ和１０μＬ待测样品溶液（１ｍｇ·ｍＬ－１）， 混匀，４ ℃放置２０ｍｉｎ。加入１０μＬ１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＤＴＮＢ和１０μＬ１０ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＡＴＣＩ，３７ ℃反应 ２０ｍｉｎ，用酶标仪测定４０５ｎｍ 处吸光度值。同时 设立背景对照组和空白对照组。按下式计算酶活性抑制率。

对３０个薰衣草提取物样品测定多酚含量，结 果如表１。其中１３、１４、１５、１６号样品多酚含量较 高，分别为６３．２０，５１．７２，４６．７９，８１．８２μｇ·ｍＬ－１； ５～１８号样品多酚含量均大于２０μｇ·ｍＬ－１；其余 样品多酚含量较低，均小于１２μｇ·ｍＬ－１。将３０个薰衣草样品的多酚含量及酶 活 性 数 值进行比较，做相关性分析，可知多酚含 量的高低与乙酰胆碱酯酶抑制活性高低可能不存 在相关性。如图中１６号样品多酚含量最高，但其 乙酰胆碱酯酶抑制活性不是最高或最低，此 外， ６号样品乙酰 胆 碱 酯 酶 抑 制 活 性 最 低，但 其 多 酚 含量为２８．１３μｇ·ｍＬ－１。由此 可 见，多 酚 不 是 薰 衣草提取物中抑制乙酰胆碱酯酶的主要活性物质。

ＡＤ在我国 患 病 率 在６５岁以 上 的 老 年 人 口 中约 占 ５％，７５ 岁 以上的老年人口中上升为２０％，８５岁以上超过４５％，到２０４０年若仍找不到 有效的防治办法，我国 ＡＤ病人将会达到９００万， 寻找安全、高效、专一的治疗 ＡＤ的天然药物刻不容缓。目前市面上销售的用于治疗 ＡＤ的药物包 括利斯的明、多奈哌齐等，对身体具有不同程度的 伤害。因此寻找高效、副作用小的天然乙酰胆 碱酯酶抑制活性产物对 ＡＤ 患者具有 重 要 意 义。 石杉碱甲是从中草药蛇足石杉中分离到的一种强 乙酰胆碱酯酶抑制剂，本研究以石杉碱甲为阳性 对照对薰衣草提取物进行乙酰胆碱酯酶抑制活性 研究，发现部分薰衣草提取物对乙酰胆碱酯酶的 抑制作 用 十 分 显 著，抑 制 率 高 达５０％～８０％，而 对于多酚含量的比较之后，可以发现，多酚不是薰 衣草提取物中抑制乙酰胆碱酯酶的主要活性物 质，二者之间不存在相关性，这为 ＡＤ药物的研发 提供了理论基础和试验依据。



 

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