恒温摇床的发酵己酸菌的选育过程

1 材料与方法

BSD-YF3600全温培养摇床：上海博迅医疗生物仪器股份有限公司；TGL-16M台式高速冷冻离心机：金坛市良友 仪器有限公司；WD-9413A型凝胶成像分析系统、DYY-8C 电泳仪：北京市六一仪器厂；Smart Spec Plus核酸蛋白分 析仪：美国伯乐公司；GT9611梯度PCR仪：杭州艾普仪器 设备股份有限公司；GC-2014岛津气相色谱仪：日本岛津 公司；YQX-T型厌氧培养箱：苏州市莱顿科学仪器有限 公司；Scientz-2C基因导入仪：宁波新芝生物科技股份有 限公司。改良麦氏培养基：葡萄糖 1.0 g，KCl 1.8 g，酵母膏4 g， 醋酸钠15 g，固体培养基加入琼脂15 g，蒸馏水1 000 mL， pH自然，121 ℃灭菌30 min，使用前加入20 mL无水乙醇。

2 结果与分析

将合成的SigB表达盒经HindIII/BamHIII双酶切连接 至经同样双酶切的pBE2R-sugar phosphatase-MCS整合型 穿梭质粒，转染BL进行抗性筛选，随机挑选10个阳性菌落 进行菌落PCR；挑7、8泳道阳性克隆培养5 mL 菌液，提取质粒进行双酶切鉴定。结果显示，整合 组所有菌株己酸产量均极显著高于对照组（P＜0.01），表明 抗性基因转录调节实现了其功能；SigA1和SigA2之间，差异 显著（P=0.024＜0.05），SigA1比SigA2显著低；SigB1显著低于 SigB2、SigB（3 P＜0.01），但SigB2与SigB3之间差异不显著（P= 0.088＞0.05），SigB3高于SigB2。基于此，本研究选择SigA2、 SigB3整合组菌株进行后续试验。

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