急性白血病中的诊断价值分析（SSW-420-2S使用）

急性白血病（acute leukemia，AL）是常见的 血液病，在血液系统恶性疾病中占首位，其准确 分型对患者的治疗和预后具有重大的指导意义。 基于形态学（包括细胞化学染色）的 FAB 分型法 是传统的分型方法。随着世界卫生组织（WHO） 对白血病分型的提出、流式细胞术的发展，免疫 分型在临床的应用越发广泛。目前，MICM 分型已 得到国内外学者的高度认可，但仍有很多基层医 院、甚至很大一部分三级医院受试剂、仪器等的 限制无法普及，尤其细胞遗传学及分子生物学分 型，在很多医院应用受阻。

材料和方法 

病例一般资料 2016 年 4 月 - 2018 年 6 月在本院确诊的初诊急性 白血病患者 119 例。所有患者均符合白血病的诊断标准，其中 AML-M0（M0）1 例，AML-M1（M1） 4 例，AML-M2（M2）37 例，AML-M3（M3）25 例， AML-M4（M4）5 例，AML-M5（M5）10 例，AML 未分型 3 例，ALL 33 例，MAL 1 例。其中男性 65 例， 女性 54 例，中位年龄 46（3-89）岁。

仪器与试剂

 瑞氏 - 姬姆萨染色液试剂盒购自珠海贝索生物技 术有限公司，过氧化物酶（POX）染色试剂、过碘酸雪夫反应（PAS）染色试剂、醋酸萘酚酯酶（NAE） 染色试剂购自广东西陇化工股份有限公司，由本 实验室配制。FACSCanto II 型流式细胞仪、所有 破膜剂、溶血素及单克隆抗体，包括：HLA-DR、 CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、 CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、 CD20、CD22、CD33、CD34、CD36、CD38、 CD41a、CD42b、CD56、CD58、CD61、CD64、 CD71、CD79a、CD105、CD117、CD123、GlyA、 CD45，均购自美国 Becton Dickinson 公司。细胞染 色体培养液、秋水仙胺购自天津瑞爱金生物科技 有限公司，ABI 7500 型 PCR 仪购自美国 Life 公司， Vilber 凝胶分析系统购自法国 Lourmat 公司，DY600 型中压电泳仪购自广东省汕头市金砂广播仪器 厂，博迅SSW-420-2S 型电热恒温水浴箱购自上海博迅 实业有限公司医疗设备厂，淋巴细胞分离液购自 华美生物工程公司，白血病相关融合基因检测试 剂盒购自上海源奇生物医药科技有限公司。 

细胞形态学检查 

选取骨髓小粒多、涂片好的骨髓涂片进行瑞氏 - 姬姆萨染色，油镜下在细胞单个散在、分布均匀 的区域分类计数 200 个有核细胞，同时进行细胞 化学染色，包括过氧化物酶（POX）染色、过碘酸 - 雪夫反应（PAS）染色、醋酸萘酚酯酶 + 氟化钠抑 制实验（NAE+NaF），计数阳性率并观察酶型。 操作主要参考《全国临床检验操作规程第三版》， 按 FAB 标准分型。 

免疫学分型

 采集患者肝素抗凝骨髓液 1-2 ml，24 h 内用流 式细胞仪进行测定，按 CD45/SSC 设门分出骨髓 细胞中的幼稚细胞群和成熟细胞群；根据需要 选择相应系列的免疫荧光标记的单克隆抗体， 进行免疫表型检测并分析其抗原表达情况，结 果判定以膜抗原＞ 20%，CD34 和胞质内抗原＞ 10% 为阳性，根据欧洲白血病免疫分类协作组（European Collaborative Group on Immunotaxonomy of Loubernix，EGIL）积分标准确定类型。 

染色体核型分析

 采集患者肝素抗凝骨髓液 2-5 ml，按 2×106 /ml 细 胞密度接种于细胞染色体培养液中，过夜培养， 终止培养前 1 h 加入终浓度为 0.05 ul/ml 的秋水仙 胺，再离心收获细胞，用甲醇和冰醋酸按 3∶1 配 置成的固定液固定 3 次，滴片，R 显带法进行核 型分析，每份标本尽可能分析至少 20 个中期相细 胞。核型描述参照《人类细胞遗传学国际命名体 制（ISCN2013）》。 

分子生物学检测

 采集患者 2-3 ml 抗凝骨髓液，加入等体积生理盐 水稀释，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，再 裂解单个核细胞，提取总 RNA，测定 RNA 浓度。 取 20 μl 反应体系，以试剂盒提供的逆转录酶、 特异引物和模板，在 37℃逆转录反应 1 h 得到 cDNA，以 cDNA 为模板进行多重巢式 PCR 反应， 最后取反应产物在 1.5% 琼脂糖凝胶中电泳，观察 分析结果。 统计学分析 采用 SPSS 17.0 软件分析，计数资料比较采用卡方 检验，P ＜ 0.05 为差异有统计学意义。

结　　果

119 例急性白血病中 M1 3 例，M2 27 例，M3 25 例， M4 5 例，M5 13 例，AML 未分型 10 例，ALL 32 例， AL 4 例。原始细胞及原始细胞等同细胞的形态和 细胞化学染色具有如下特征：①原始粒细胞：胞 体多数圆形或类圆形，胞浆量少、天蓝色、绕于 核周，胞浆无颗粒或见细小嗜天青颗粒，胞核圆 形或类圆形，居中或稍偏位，染色质细颗粒网状、 均匀平坦，有淡蓝色核仁 1- 数个。POX 染色阳性 率≥ 3%，呈弱阳性、阳性或较强阳性，阳性反应 物颗粒较粗大、聚集、浓缩。PAS 染色多 为弱阳性，阳性反应物表现为细颗粒弥散状。非 特异性酯酶（NAE）染色呈阴性或弱阳性，阳性 反应物表现为弥散状，不被 NaF 抑制。② M2b 细胞： 有二种类型，一种分化程度差，原始细胞胞核常 见凹陷，染色质细致，核仁常见，核凹陷处常见“黄 沙土样”改变，或称“朝阳红”, 易见 1 或 2 根细长 Auer 小体。

讨　　论

 急性白血病形态学分型是结合细胞形态学和细胞 化学染色特征进行分型，可对急性白血病进行亚 型诊断，迄今为止，仍是白血病诊断的基础。 卢兴国教授也提出，所有白血病诊断的起点是 基于外周血细胞形态学的检验，经检查和评估得 到的信息具有重要的临床意义和价值。本研究发 现，某些类型的急性白血病有其典型的形态学特 征，如M3、M4EO，单纯靠形态学基本可以明确诊断， 这两种类型白血病也可以单纯靠细胞遗传学或分 子生物学直接诊断，但后者检测时间较长，且受 仪器、试剂等的限制无法广泛普及；本次研究还 发现，单纯形态学分型的诊断符合率达 76.5%，接 近单纯免疫学分型的诊断符合率（79.8%），两者 间的差异无统计学意义。

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