大鼠深静脉血栓预防作用分析-灭菌器的使用！！

深静脉血栓( deep vein thrombosis，DVT) 好发于下肢，常 继发于手术、分娩、肿瘤等危险因素，尤其在骨科大手术后， 其发病率每年不断上升。中医药在预防深静脉血栓发挥 着重要作用。本实验研究血府逐瘀汤对深静脉血栓大 鼠模型血栓湿重的影响及血浆组织型纤溶酶原激活剂( t － PA) 、组织型纤溶酶原激活剂抑制物( PAI) 的影响。现将实 验方法与结果报告如下。

1 实验材料

1. 1 动物

SPF 级 SD 雄性大鼠，50 只，体质量( 265. 83 ± 19. 53) g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物 合格证号: 43004700012066。

1. 2 药物

血府逐瘀汤药物组成符合《方剂学》中要求 ( 由桃仁 12g、红花 9g、当归 9g、生地黄 9g、川芎 4. 5g、赤芍 6g、牛膝 9g、柴胡 3g、桔梗 4. 5g、枳壳 6g、甘草 6g 组成) ，由湖 南中医药大学第二附属医院药剂科提供道地药材并煎制。 制备方法: 蒸馏水浸泡 1h，煮沸 30min 后过滤取液，再加水 残渣煮沸，如此反复操作 2 次，合并 2 次滤液，浓缩至每毫升 含生药 0. 684g，熬制完毕，将中药放于立式压力蒸汽灭菌器(上海博迅BXM-30R)里灭菌，放入 4℃冰箱冷藏备用。低分子肝素钠: 4000IU/支 ( Laboratoire AVENTIS，批号: H20030601 － 605) 。

1. 3 仪器及试剂

JY3002 型电子天平( 上海精密科学仪器有限公司) ; Elisa 试剂盒。

2 实验方法

2. 1 动物分组及给药

将 50 只雄性 SD 大鼠随机分成4 组， 血府逐瘀汤组( n = 13) : 灌胃血府逐瘀汤生药 6. 84g /( kg·d) ; 低分子肝素钠组( n = 13) : 每日肌内注射低分子肝素钠， 600IU/( kg·d) ; 模型对照组( n = 13) : 灌胃用 0. 9% 氯化钠 注射液 10ml /( kg·d) ; 假手术组( n = 11) : 灌胃用 0. 9% 氯 化钠注射液 10ml /( kg·d) 。每组均给药 7d。

2. 2 模型制备

给药结束后对除假手术组外的其余 3 组参 照温定文等方法建立深静脉血栓动物模型。腹腔注射 1% 戊巴比妥钠( 0. 1ml /20g) 麻醉大鼠后固定，腹部消毒后 沿其腹白线逐层打开腹腔，切口不能太大，下至凝固腺，上 至露出肝脏一角即可。将腹腔内小肠等器官拖出放置于大 鼠左侧，暴露出下腔静脉，动作要轻柔，避免损伤器官，拖出 的器官用浸润过 0. 9% 氯化钠注射液的纱布包裹，防止长期 置于空气中造成脱水。移至体视显微镜下，钝性分离血管 周围结缔组织，暴露下腔静脉及其分支，在肾静脉下方将腹 主动脉和下腔静脉剥离开，然后用 7 /0 缝合线将下腔静脉结 扎，之后逐个将其分支结扎。按解剖位置将肠道等器官放 回腹腔，在腹腔中加入 1% 氨苄溶液 0. 2ml，防止感染。用 5 /0 缝合线逐层缝合腹腔，术后置于 25℃ ～ 28℃ 的环境中， 直至大鼠复苏，即可正常饲养。假手术组除不结扎下腔静 脉及其分支外，其他操作同造模组。

2. 3 观察指标

造模术后 72h 每组随机取 5 只大鼠脱臼处 死，剖开腹部，移开小肠等器官，及时股动脉放血，分离血 浆，Elisa 试剂盒检测 t － PA、PAI 水平; 暴露大鼠下腔静脉， 置于体视显微镜下，截取下腔静脉及分支静脉结扎段，电子 天平称取血栓湿重。 各组剩余大鼠于造模术后第 10 天脱臼处死，剖开腹部， 移开小肠等器官，及时股动脉放血，分离血浆，Elisa 试剂盒 检测 t － PA、PAI 水平，并检测其凝血常规及抗凝血酶Ⅲ 水平。

2. 4 统计学方法

实验数据用 SPSS 21. 0 统计软件包处 理。计量数据描述均采用均数 ± 标准差( x ± s) 表示，经正 态性检验( kolomogorov － smirnov 法) ，方差齐性检验后，若满 足条件，组间差异采用多个样本两两比较方差分析检验 ( LSD 法) 。若不满足条件，组间差异采用多个样本两两比 较秩和检验。P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。

3 实验结果

本组大鼠造模前无死亡，均造模成功，造模术后 2 只 ( 模型对照组和低分子肝素钠组各 1 只) 死亡，死亡原因为 肺栓塞 1 只和腹腔内出血 1 只。

3. 1 血栓湿重

与假手术组相比，模型对照组湿重较重，差 异有统计学意义; 与模型对照组相比，低分子肝素钠组、血 府逐瘀汤组血栓湿重较轻，差异均有统计学意义; 血府逐瘀 汤组和低分子肝素钠组比较差异无统计学意义; 血府逐瘀 汤组和低分子肝素钠组的抑制率均大于 30% ，提示有良好 的预防血栓形成的作用。( 见表 1)

3. 2 血浆

t － PA 和 PAI 水平 1) 血浆 t － PA。2 个时段组 内比较: 模型对照组与假手术组相比，差异无统计学意义; 与模型对照组相比，低分子肝素钠组、血府逐瘀汤组血浆 t － PA含量较高，差异有统计学意义; 血府逐瘀汤组和低分 子肝素钠组比较，差异无统计学意义。组内 2 个时段之间比 较: 同组术后 72h 与 10d 之间无明显差异。说明低分子肝素 钠组和血府逐瘀汤组有良好的促进血浆 t － PA 生成的作用， 但是对造模术后 72h 与 10d 之间的促进效果差别不大。 2) 血浆 PAI。2 个时段组内比较: 模型对照组与假手术组相 比，差异无统计学意义; 与模型对照组相比，低分子肝素钠 组、血府逐瘀汤组血浆 PAI 含量较低，差异有统计学意义; 血府逐瘀汤组和低分子肝素钠组比较，差异无统计学意义。 组内 2 个时段之间比较: 同组术后 72h 与 10d 之间无明显差 异。说明血府逐瘀汤组和低分子肝素钠组有良好的抑制血 浆 PAI 生成的作用，但是对造模术后 72h 与 10d 之间的抑制 效果差别不大。

4 讨 论

血栓的形成是一个复杂过程，与血流动力学、血管壁、 血小板、凝血与纤溶活性等诸多因素有关。正常情况下，凝 血系统和抗凝系统处于动态平衡，如果凝血系统被激活，且 占优势时，则出现血栓性疾病。血府逐瘀汤作为深静脉 血栓防治的重要代表方之一，具有活血化瘀、行气止血功 效。本实验从预防深静脉血栓理念出发，对 SD 大鼠造模前 预防性服用血府逐瘀汤或低分子肝素钠，实验结果显示，在 血栓造模术后 72h 血府逐瘀汤组及低分子肝素钠组血栓湿 重与模型组比较，差异有统计学意义，血府逐瘀汤组及低分 子肝素钠组血栓湿重无差异，说明术前进行血栓防治干预 能够有效减轻血栓的形成且血府逐瘀汤与低分子肝素钠作 用无差异。t － PA 和 PAI 对机体纤溶系统活性起到重要的 调节作用。本实验结果显示，血府逐瘀汤组及低分子肝素 钠组促进 t － PA 与抑制 PAI 生成均优于模型组，且在术后 72h 与术后 10d 2 个时段作用效果无明显差异，说明术前进 行血栓防治干预能够有效促进 t － PA 与抑制 PAI 生成，且作 用效果可持续一定时间。通过检测造模后大鼠凝血相关指 标，发现其能够刺激抗 AT － Ⅲ，缩短凝血时间。