小鼠抗疲劳性能分析-恒温水槽的使用！！！

随着社会高速的发展，生活节奏的加快、工作压 力的增大，人们的机体与心理往往处于高度紧张的 状态，因此疲劳越来越成为影响人们生活质量的重 要因素。疲劳作为一种在脑力或体力活动到达 一定阶段时出现的正常的生理现象，是指机体生理 过程不能持续其机能在特定水平或整体不能维持预定的运动强度而出现的一种状态，可以引起机体 运动能力降低、差错事故增多、工作效率降低、战斗 力减退、反应迟钝、动作协调性降低。

1 材料与方法

1. 1 实验材料

成年雄性昆明种小鼠 96 只，平均体重( 24 ± 2) g( 泰邦生物科技公司提供) 。活性免疫球蛋白蛋黄 粉( 注: 低温制备的免疫球蛋白蛋黄粉) 和缺乏活性 免疫球蛋白的蛋黄粉( 普通蛋黄粉) ( 注: 常规 180° C 以上高温瞬间喷雾干燥方法制备的蛋黄粉) 均由 潍坊康奥思生物技术有限公司提供。血 尿 素 氮 ( BUN) 测试盒、全血乳酸( LD) 测试盒、糖元测试盒、 丙二醛( MDA) 测试盒均购自南京建成生物工程研 究所。UV754 分光光度计( 上海第三分析仪器厂) ， DK-8D型电热恒温水槽（上海博迅提供），有机玻璃材质的 50 cm × 50 cm × 50 cm 游泳箱。

1. 2 方法

1. 2. 1 活性免疫球蛋白的效价测定

分别对活性 免疫球蛋白蛋黄粉、普通蛋黄粉和生理盐水进行抗 鸡新城疫病毒( NDV) 和禽流感病毒( AIV) 血清型 H9 抗原血凝抑制抗体( HI) 效价的测定。取活性 免疫球蛋白蛋黄粉和普通蛋黄粉各 1 g，充分溶解到 10 mL 生理盐水中，然后分别取 50 μL 在 96 孔 V 型 版上做递倍稀释，每孔再加入同体积的 4 单位抗原， 混匀，置 37℃中和 1 h。抽取公鸡血液，2 000 r/min 离心 5 min，去上清及表层白细胞，生理盐水冲洗红 细胞，继续以上述条件离心，如此反复洗涤红细胞 3 ～ 5 次收集红细胞，以生理盐水制成 1% 的红细胞悬 液。抗原与样品中和后加入 1% 的红细胞悬液，置 37℃ 40 min 后观察结果。

1. 2. 2 小鼠分组及饲喂方法

将 96 只小鼠适应性 喂养 1 w 后，按体重随机分为 4 组，设低浓度组( 活 性免疫球蛋白蛋黄粉) 、高浓度组( 活性免疫球蛋白 蛋黄粉) ，蛋黄粉对照组( 普通蛋黄粉) 和空白对照 组 ( 蒸馏水) ，每组 24 只，每次实验从对应分组中随机抽取 8 只。组间体重差异无统计学意义。适应性 饲养观察 5 d 后灌胃相应受试物，低、高浓度组分别 以 50 mg /( kg·d) 、100 mg /( kg·d) 的活性免疫球 蛋白蛋黄粉溶液灌胃，蛋黄粉对照组以 100 mg /( kg ·d) 的缺乏活性免疫球蛋白的蛋黄粉溶液灌胃，空 白对照组以同体积蒸馏水灌胃。实验期间小鼠自由 饮水及摄食，连续灌胃 15 d 后进行各项抗疲劳指标 的测定。实验开始及结束时用电子秤称量小鼠体 重。

1. 2. 3 小鼠力竭游泳实验

末次灌胃 30 min 后， 各组随机抽取 8 只小鼠，于鼠尾根部固定其体重 5% 铅皮，放入水温为( 30. 0 ± 2. 0) ℃、水深 30 cm 的 恒温游泳箱中，每个水箱 1 次放入 4 只小鼠。将小 鼠头部沉入水中 10 s 内不返回水面视为力竭，用秒 表记录自游泳开始至力竭死亡的时间，即小鼠的游 泳时间。

1. 2. 4 小鼠全血乳酸测定

末次灌胃 30 min 后， 各组随机抽取 8 只小鼠，眼眶采血 0. 1 mL，然后负 重游泳( 负体重的 4% ) 10 min，休息 30 min 后再次 眼眶采血 0. 1 mL。试管编号，各管加入 0. 6 mL 蛋 白沉淀剂混匀，3 500 ～ 4 000 r/min 离心 10 min，取 上清液进行测定，具体步骤按相应试剂盒说明书操 作。

1. 2. 5 小鼠血清尿素氮测定

末次灌胃 30 min 后，各组随机抽取 8 只小鼠，于 30℃ 的水中无负重 游泳 90 min，捞出小鼠擦干，休息 30 min 后拔眼球 采血约 0. 5 mL( 不加抗凝剂) 。放入 4℃冰箱中约 3 h，全血凝固后 2 000 r/min 离心 15 min，取血清备 用。血清中的尿素氮与二乙酰肟反应生成红色物 质，根据色泽深浅来计算尿素氮含量，具体步骤按相 应试剂盒说明书进行。

1. 2. 6 小鼠运动后肝糖原测定

末次灌胃 30 min 后，各组随机抽取 8 只小鼠，于 30℃ 的水中无负重 游泳 90 min，捞出擦干休息 30 min 后立即脱颈处死 小鼠，取新鲜肝脏标本经生理盐水漂洗后，滤纸吸 干，称重; 按样本重量( mg) ∶ 碱液体积( μL) = 1∶ 3，一起加入试管中，沸水浴煮 20 min，流水冷却; 将 糖原水解液进一步制备成糖原检测液，具体步骤按 相应试剂盒说明书进行。

2 结 果

抗 NDV 和 AIV 血清型 H9 抗原血凝抑制抗体 ( HI) 效价的测定( log2 ) 如表 1，结果显示: 活性免疫 球蛋白蛋黄粉对 NDV 和 AIV 血清型 H9 两种抗原 的血凝抑制抗体( HI) 效价均很高，分别为达到 log2 的 7 和 9，但在普通蛋黄粉和生理盐水对照组均未 检测到抗体( 表 1) 。

空白对照组、蛋黄粉对照组、低浓度组和高浓度 组小鼠 负 重 游 泳 时 间 分 别 为 ( 450. 38 ± 44. 48 ) 、 ( 482. 10 ± 72. 16 ) 、( 519. 25 ± 109. 99 ) 、( 3059 ± 885. 41) s，实验组与空白对照组比较，小白鼠负重游 泳时间明显延长，高浓度组尤为显著，各实验组与空 白对照组对比差异显著( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) 。表 明活性免疫球蛋白蛋黄粉可以明显延长实验小白鼠 的负重游泳时间，即能够有效提高小白鼠的运动耐 受能力。

3 讨 论

疲劳是涉及多种生理生化因素的综合过程，是 体力或脑力活动到一定程度时机体必然会产生的一 种正常生理现象，抗疲劳效果包含延缓疲劳的产生 和加快疲劳的消除。运动、生活、工作过程中，疲劳 的发生不可避免，针对疲劳问题，传统的药物干预， 可能对机体造成毒副作用。补充营养元素对疲劳进 行干预，是一种安全无毒副作用的有效措施。运动 过程中合理改善饮食，增加营养素的摄入，如蛋白 质、碳水化合物或脂肪酸等，可产生一定的抗疲劳效果。