高压灭菌锅的使用-血管壁巨噬细胞形成的影响分

动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是一种多因 素复杂的炎症性疾病，是引起心血管类疾病的主要 原因。动脉粥样硬化早期发生发展的两个关键因 素是循环单核细胞跨内皮迁移进入血管壁及巨噬细 胞衍生泡沫细胞的形成。因此，抑制单核细胞迁 移、减少血管壁内巨噬细胞的形成对于抑制动脉粥 样硬化的发生意义重大。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂

人单核细胞株 THP-1 细胞，由上海生物科学研究所细胞资源中心提供，并在实验室进行传 代保株；体内实验所用 ApoE-/-小鼠由上海 SLAC 实 验室提供，许可证号：SCXK（上海）2017-0005；姜 黄素（生产批号：118-39-5，纯度≥98%），西安天丰 生物科技有限公司；胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、 100 U·mL-1链霉素溶液，美国 Hyclone 公司；肉豆蔻 酸佛波酯（PMA），德国达姆施塔特，Calbichem； LPS，美国 Sigma 公司；TRIzol 试剂，美国 Invitrogen 公司；LS，北京艾德莱生物科技有限公司；高迁移 率族蛋白 B1（HMGB1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1） ELISA 试剂盒，南京建成生物工程研究所；二异氰酸 酯试剂盒，美国 Thermo Science 公司；聚偏二氟乙烯膜 （Milli 孔隙），美国 Bedford 公司；脂质体 TMRNAiMAX 转 染 试 剂 ， 美 国 InvitrogenLife Technologies 公 司 ； RT-PCR 试剂盒、WB 试剂盒，赛默飞世尔科技（中 国）有限公司；逆转录试剂盒，美国 Thermo Fisher Science 公司；其他试剂均为化学分析纯。

1.1.2 仪器

细胞计数器，美国 Nexcelom Bioscience LLC 公司；TriStar 2 LB 942 型多功能酶标仪，德国伯托公司；倒置显微镜，日本 Olympus 公司；紫外 可见分光光度计，北京莱伯泰科仪器有限责任公司；AR2130 型电子分析天平，上海梅特勒-托利多 有限公司；超低温冰箱，美国 Thermo 公司；BXM50VD 型高压灭菌锅，上海博迅医疗生物仪器股份有 限公司；流式细胞仪，美国 Beckman Coulter 公司； J-2 000 型高速分散匀质器，常州丹瑞实验仪器设备 有限公司；F3 型全自动荧光与可见光凝胶成像分析 系统，英国 Syngene 公司；Western Blot 蛋白显影 仪，美国 Protein Simple 公司；低温高速离心机，盐 城凯特实验仪器公司；生物组织自动包埋机，湖北 康龙电子科技有限责任公司；7500 型 RT-PCR 仪， 德国 Leica 公司。

2 结果

与空白对照组相比，LPS 组细胞迁移数量显著增 加（P＜0.01）；与 LPS 组相比，姜黄素-20 组细胞迁 移数量显著降低（P＜0.05）；姜黄素-40、姜黄素-80 组细胞迁移数量显著降低（P＜0.01）。提示在一定的 浓度范围内，THP-1 细胞迁移量与姜黄素的给药剂 量呈剂量依赖性降低趋势。与空白对照组相比，LPS 组 细胞 HMGB1、MCP-1 蛋白表达水平均显著升高（P＜ 0.01）；与 LPS 组相比，姜黄素-20 组细胞 HMGB1、 MCP-1 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）；姜黄 素-40、姜黄素-80 组细胞 HMGB1、MCP-1 蛋白表 达水平均显著降低（P＜0.01）。提示 THP- 1 细胞HMGB1、MCP-1 蛋白表达与姜黄素的给药剂量存在 一定负相关，即呈剂量依赖性降低趋势。与空白对照组相比，LPS 组细胞 HMGB1、MCP-1 mRNA 表达水平均显著升高 （P＜0.01）；与 LPS 组相比，姜黄素-10 组 MCP-1 mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05）；姜黄素-20 组 细胞 HMGB1 mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05）， MCP-1 mRNA 表达水平显著降低（P＜0.01）；姜黄 素 - 40 组 、 姜 黄 素 - 80 组 细 胞 HMGB1、 MCP- 1 mRNA 表达水平均显著降低（P＜0.01）。说明 THP-1 细胞 HMGB1、MCP-1 mRNA 表达水平与姜黄素的给 药剂量存在一定负相关关系，即呈剂量依赖性降低 趋势。与空白对照组相比，LPS 组细胞 AMPK、PPARα 蛋白表达水平均显著降 低，差异有统计学意义（P < 0.01），STAT3 蛋白表达 水平显著升高，差异有统计学意义（P < 0.01）；与 LPS 组相比，姜黄素-10 组细胞 AMPK 蛋白表达水平 差异无统计学意义（P > 0.05），PPARα 蛋白表达水 平显著升高，差异有统计学意义（P < 0.05），STAT3 蛋白表达水平显著降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；姜黄素-20 组细胞 AMPK 蛋白表达水平差异 无统计学意义（P > 0.05），PPARα 蛋白表达水平显著 升高，差异具统计学意义（P < 0.05），STAT3 蛋白表 达水平显著降低，差异具有统计学意义（P < 0.05）； 姜黄素-40、姜黄素-80 组细胞 AMPK、PPARα 蛋白 表达水平均显著升高，差异有统计学意义（P < 0.01），STAT3 蛋白表达水平显著降低，差异有统计学意义（P < 0.01）；说明 THP-1 细胞 AMPK、PPARα 蛋白表达水平与姜黄素的给药剂量存在一定正相 关，即呈剂量依赖性升高趋势，而 STAT3 蛋白表达 水平与姜黄素的给药剂量存在一定负相关，即呈剂 量依赖性降低趋势。