上海博迅细菌培养箱对胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

胃癌以高发病率、高病死率、高隐匿性为主要特征， 是常见的恶性肿瘤，发病率仅次于肺癌，患者确诊时大 多为中晚期，已经失去了最佳手术的机会; 化疗药物由于 严重的毒副作用，很多患者不能耐受，并且免疫抑制、肿 瘤耐药等因素也是限制疗效的主要原因，故越来越多的 研究者将目光转移到传统医学领域，以期找到低毒副作用、 高疗效的药物。六味安消散由碱花、大黄、山柰、诃子、 藏木香、寒水石 6 味药材组成，具有解痉、化积消食之功 效，临床上主要用于胃痉挛、胎衣滞留、大便秘结、胃腹 胀满、食积不化等症状的治疗，方中大黄、山柰、藏木 香、寒水石具有抗肿瘤作用，而碱花、诃子具有调节免疫 功能，但其抗肿瘤及免疫调节作用尚无报道。

1 材料

1. 1 动物与细胞株

BalB/C 小鼠，清洁级，体质量 ( 20± 2) g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证 号 SYXK ( 京) 2017-0033。小鼠胃癌 MFC 细胞株由上海拜 格生物公司提供。

1. 2 试药

六味安消散购于内蒙古民族大学附属医院蒙药 制剂室，内药制字 M13060034。噻唑蓝 ( MTT) 检测试剂 盒购于美国 Sigma 公司; 碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶免疫复 合物 ( APAAP) 购于上海钰博生物科技有限公司; CD4、CD25 单克隆抗体购于美国 BD 公 司; 肿 瘤 坏 死 因 子-α ( TNF-α) 、白细胞介素-2 ( IL-2) 检测试剂盒购于上海纪宁 生物科技有限公司。

1. 3 仪器

分析天平 ( 型号 BSM-120，上海卓精电子科技有限公司) ; 细胞培养箱 ( 型号 HPX-9052MBE，上海博迅医疗生物仪器股份有限公司) ; 紫外可见分光光度计 ( 型 号 UV-2102PCS，美国尤尼柯公司) ，全自动酶标仪 ( 型号 ELx800，美国宝特公司) 。

2 方法

取对数生长期 MFC 细胞，调整密度为 2×106 /mL，在小鼠右侧腋下接种 0. 2 mL，1 周后可见米粒 大小肿瘤，提示建模成功。取建模成功的小鼠 60 只，随机 分为模型组、5-氟尿嘧啶组 ( 0. 02 g /kg) 及六味安消散 高、中、低剂量组 ( 8、4、2 g /kg) ，每组 12 只，灌胃给 药，1 次/d。给药期间，每天称定小鼠体质量，并观察小 鼠毛发、食欲、精神等一般状态给药 14 d 后， 颈椎脱臼处死小鼠，小心剖取肿瘤、脾脏、胸腺，磷酸盐 缓冲液冲洗残留血迹，滤纸吸干，精密称定质量，计算抑 瘤率及脾脏、胸腺指数。抑瘤率= ［( 模型组瘤重－给药组 瘤重) /模型组瘤重］ ×100%，脾脏指数 =脾脏重/体质量， 胸腺指数=胸腺重/体质量。取各组小鼠脾 脏，去除脂肪和结缔组织，剪碎，置于含 10%小牛血清的 ＲPMI-1640 培养液中，过 200 目细胞筛。低温条件下加红 细胞裂解液离心，Hank’s漂洗 3 次后，重悬于含 10%小牛 血清的 ＲPMI-1640 培养液中，APAAP 法测定细胞比例。给药 14 d 后，小鼠摘眼球取血， 酶联免疫吸附 ( ELISA) 法检测外周血 TNF-α、IL-2 水平。 2. 5 统计学分析 通过 SPSS17. 0 软件进行处理，数据以 ( x±s) 表示，2 组间比较采用 LDS-t 检验，多组间比较采用 单因素方差分析。以 P＜0. 05 表示差异具有统计学意义。

3 结果

表 1 显示，给药前 各组小鼠体质量差异无统计学意义 ( P＞ 0. 05) ; 给药后， 与模型组比较，5-氟尿嘧啶组小鼠体质量显著下降，而六 味安消散组显著增加 ( P＜0. 05，P＜0. 01) 。此外，模型组、 5-氟尿嘧啶组小鼠毛发暗淡，食欲不佳，精神萎靡; 六味 安消散组小鼠毛发光泽，食欲佳，精神良好。


4 讨论

本实验采用移植性肿瘤模型，它可保持机体完整性， 不影响外界环境和机体的正常联系，是评价药物抑瘤作用 及调节免疫功能的经典模型。给予 MFC 胃癌荷瘤小鼠六味安消散后发现，小鼠一般状态好于模型组，体质量明显 增加，瘤重下降，提示该药物具有较好的抗肿瘤作用。恶 性肿瘤患者往往会出现免疫抑制情况，免疫抑制与预后、 临床分期等关系密切，故提高机体免疫功能有利于增加抗 肿瘤效果。脾脏和胸腺对机体的免疫能力有标示作用，是 机体细胞、体液免疫的主要器官，其脏器指数能在一定水 平上评价机体免疫功能的高低，本实验发现六味安消散 组小鼠脾脏、胸腺指数明显增加，初步判断六味安消散具 有提高免疫功能的作用。



 

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