大鼠体内硝苯地平药动学的分析（HPX-9052MBE使用）

硝苯地平是当今治疗心脑血管疾病最常见的一线药物，主要用于高血压、心律失常、心绞痛等病的治疗。 该药在发挥药效的同时，常常会引起转氨酶升高、黄疸 等药物性肝损伤。甘草是一种历史悠久、应用广泛的 中药，在方剂中常作为使药，有“无甘草不成方”之说，在 中医经方《伤寒论》一百一十三方中，多达七十七方含有甘草。

1 材料

1.1 仪器

LC-20 高效液相色谱仪（包括 LC-20A 真空在线脱 气机、LC-20AT四元泵、CTO-10 AS柱温箱、SPD-M20 A 检测器）和 AUY120 电子天平均购自日本 Shimadzu 公 司；5427R离心机（德国艾本德公司）；VX-Ⅲ涡旋混合器 （北京踏锦科技有限公司）；BF-2000氮气吹干仪（北京八 方世纪科技有限公司）；博迅HPX-9052MBE恒温烘箱（上海博讯医疗设备厂）。

1.2 药品与试剂

地西泮对照品（内标，美国 Sigma-Aldrich 公司，批 号：439-14-5，纯度：99.7％）；甘草酸对照品和硝苯地平 对照品（阿拉丁公司，批号：1405-86-3、21829-25-4，纯 度：99.73％、99.76％）；甲醇（国药集团化学试剂有限公 司，批号：67-56-1，色谱级）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na， 批号：C8621-25g）和肝素钠（批号：9041-08-1）均购自北 京索莱宝科技有限公司；乙酸乙酯和环已烷均为分析 纯，水为超纯水。

1.3 动物

SD大鼠，SPF（无特定病原体）级，♀，2月龄，体质量 （210±20）g，由安徽医科大学实验动物中心提供，动物 使用许可证号：SYXK（皖）2017-006。所有大鼠饲养在 温度、湿度、灯光受调控的房间，给予正常饮食，在标准 环境饲养2周后开始实验。

2 方法与结果

2.1 分组与给药

将大鼠随机分成对照组和实验组，每组10只。实验 组大鼠灌胃甘草酸 5 mg/kg[5 （] 溶剂为 0.5％CMC-Na 溶 液，给药剂量按临床成人常用剂量换算），对照组大鼠灌 胃等量的0.5％CMC-Na溶液，每日1次，连续14 d。第13 天夜里，将大鼠禁食过夜（晚上10：00－第2天白天实验 前），但是自由饮水，于第14天灌胃30 min后，实验组和 对照组大鼠同时灌胃硝苯地平 3 mg/kg[6 （] 溶剂为 0.5％ CMC-Na溶液，给药剂量按临床成人常用剂量换算）。

2.2 样品采集

分别于给予硝苯地平前和给药后0.25、0.5、0.75、1、 1.5、2、3、4、6、8、12、24 h从眼内眦取血0.5 mL，置于预先 加入肝素钠的试管中，4 ℃下 3 000 r/min 离心 10 min， －20 ℃冷冻保存备用。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品溶液的制备

精密称取硝苯地平对照品 3.0 mg，置于10 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度， 混匀，得到质量浓度为 0.3 mg/mL 的硝苯地平贮备液。 准确称取甘草酸对照品 10.0 mg，置于 10 mL 量瓶中， 用甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，得到质量浓度为 1.0 mg/mL的甘草酸贮备液。上述溶液均置于冰箱2～8 ℃ 保存备用。

2.3.2 内标溶液的制备

精密称取地西泮对照品 1.00 mg，置于 100 mL 量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻 度，混匀，得到质量浓度为 10.0 μg/mL 的内标贮备液。 精密量取内标贮备液 1.00 mL，置于 100 mL 量瓶中，用 适量甲醇溶解并稀释至刻度，混匀，得到质量浓度为 100 ng/mL的内标溶液，置于冰箱2～8 ℃保存备用。

2.4 血浆样品的处理

精密量取待测血浆样品 200 μL，置于 1.5 mL EP 管 中，加入10 μL内标溶液（100 ng/mL），加入乙酸乙酯-环 己烷混合液（3 ∶ 1，V/V） 1 mL 萃取，涡旋 1 min，4 000 r/min 离心 5 min。取上清液 0.8 mL，置于干净的 EP 管 中，55 ℃水浴加热，N2吹干，并将残余物用100 μL流动 相复溶，取20 μL上清液进样分析。

2.5 色谱条件

色谱柱：ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相： 甲醇-水（62∶38，V/V，乙酸调pH为4.5）；流速：1.0 mL/min； 柱温：30 ℃；检测波长：238 nm；进样量：20 μL。

2.6 专属性试验

取空白血浆、加硝苯地平的空白血浆、大鼠灌胃后 12 h 时的给药血浆各 1 份，按照“2.4”项下方法处理后 （其中空白血浆不加内标溶液），再按照“2.5”项下色谱条 件进样测定，记录色谱。结果显示，硝苯地平和地西泮 的保留时间分别为9.6、5.9 min，血浆里的杂质不影响硝 苯地平的测定，硝苯地平和地西泮可以完全分离，峰形 良好，可见本方法具有专属性高、分离度好的特点，可以 准确测定硝苯地平的浓度。

2.7 线性关系与定量下限的考察

将200 μL空白血浆，置于离心管中，加入10 μL内标 溶液（100 ng/mL），再分别加入50 μL不同质量浓度的硝 苯地平对照品溶液至终浓度分别为20、40、80、160、320 ng/mL。再按照“2.4”项下方法处理后（不再加内标溶 液），按“2.5”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以硝 苯地平质量浓度为横坐标（x），以硝苯地平与内标峰面 积比值的均数为纵坐标（y），采用加权最小二乘法进行 线性回归分析，得回归方程为 y＝0.011x－0.006 6（r＝ 0.999 4），硝苯地平的检测质量浓度在20～320 ng/mL线 性范围内与峰面积呈良好的线性关系。以信噪比值＝ 10确定的定量下限为5 ng/mL。

3 讨论

当今社会，临床上中西药结合治疗已成常态。中西 药联用可以发挥各自优势，取长补短，提高疗效，但也会 不可避免地因两者发生相互作用从而引起一系列不良 反应，其中代谢酶的改变是最主要因素之一。硝苯地平为肝脏主要代谢酶细胞色素P450（CYP）3A4的底物 ，而 甘草酸会诱导 CYP3A4 的活性，所以甘草酸有可能会 对硝苯地平的药动学产生影响。



 

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