三叶苷质量标准分析

木姜叶柯 Lithocarpus litseifolius( Hance) Chun 为壳斗 科柯属常绿植物，多分布在长江以南的低山密丛中， 药 食兼 用 ，可 做 茶、糖、药 。其 有 清 热 利尿、滋肝 养 胃、化痰、祛风、降压等功效，可用于治疗湿热痢疾、皮 肤瘙痒、肺热咳嗽、高血压等症。近代医学研究证明， 木姜叶柯具有抗氧化 、免疫抑制、降血糖等药理 作用。三叶苷是其主要活性成分之一，具有抗糖尿病、 抗人类免疫缺陷病毒 ( HIV) － 1 感染 、抗炎等作用。

1 仪器与试药

1．1 仪器

1260 型 高 效 液 相 色 谱 仪 ，包 括 G1311B 四 元 泵、 4212BDAD 型二极管阵列检测器( 美国 Agilent 公司) ; AUW120D 型电子分析天平 ( 日 本 Shimadzu 公 司 ) ; Mighty － 10 型超纯水机( 上海砾鼎水处理设备有限公司) ; BZF-50 型真空干燥箱( 上海博讯实业有限公司医疗设 备厂) ; 薄层色谱( 青岛海洋化工厂) 。

1．2 试药

三叶苷对照品( 四川省维克奇生物科技有限公司， 批号为 WKQ18052505，含量 ＞ 98． 0% ) ; 所用试剂均为 分析纯，水为超纯水。木姜叶柯药材购自湖南省溆浦县 君健中药材专业合作社，经湖南医药学院蔡伟副教授鉴 定为正品。

2 方法与结果

2．1 提取、分离与结晶

取木姜叶柯药材 0． 1 kg，用粉碎机稍加粉碎，过 2 号筛，置 2 000 mL 圆底烧瓶中，以 10 倍量水在 80 ℃ 条 件 下 提 取 3 次 ，每 次 1 h，得 残 渣 和 滤 液 ，合 并 滤 液，于冰箱冷藏静置 12 h，滤过，得黄色沉淀物，减压干 燥( 55 ℃ ) 24 h，得三叶苷粗品。在无水乙醇溶液中缓慢 加入三叶苷粗品，边加热边溶解，待三叶苷饱和溶解后， 冷却溶解液得结晶，重复 3 次，干燥，得三叶苷纯品。

2．2 水分测定

按 2015 年版《中国药典(四部)》通则 0832 项下水 分测定法第二法( 烘干法) 测定三叶苷纯品中的水分。取 三叶苷纯品约 2 g，置干燥至恒重的称量瓶中，精密称 定，打开锥形瓶瓶塞，置 105 ℃干燥箱中干燥 5 h，移出， 并迅速盖上瓶盖，置干燥器中冷却 30 min，精密称定，继续干燥 1 h，迅速取出，冷却后称定质量，连续 2 次干燥 后的质量差小于 5 mg 时停止干燥，根据损失的质量，计 算三叶苷纯品中水分含量，重复 3 次。结果三叶苷纯品 水分含量为(3． 550 ± 0． 163 )% 。

2．3 结构鉴定

白 色 针 状 结 晶 。1 H － NMR ( 500 MHz，DMSO) δ: 7． 03( 2H，d，J = 8． 0 Hz，H － 2，H － 6) ，6． 66( 2H，d，J = 8． 0 Hz，H － 3，H － 5 ) ，6． 04( 2H，S) ，4． 88( 1H，d，J = 7． 71 Hz) ，5． 36( 1H，d，J = 5． 82 Hz) ，5． 13( 1H，d，J = 5． 42 Hz) ，2． 78( 2H，t，J = 7． 66 Hz，H － β) 。13 C － NMR δ: 131． 49( C － 1) ，129． 20( C － 2，C － 6) ，155． 42( C － 4 ) ， 115． 09( C － 3，C － 5) ，45． 77( C － α) ，29． 32( C － β) ， 205． 07( C  O) ，105． 23( C － 1' ) ，163． 39( C － 2' ，C － 6') ，95． 07 ( C － 3'，C － 5') ，163． 74( C － 4') ，99． 52( C － 1″ ) ，73． 05( C － 2″ ) ，76． 41( C － 3″ ) ，69． 41( C － 4″ ) ， 77． 14( C － 5″) ，60． 48( C － 6″) 。以上数据与报道结果基本一致，故鉴定化合物为三叶苷。

2．4 薄层鉴别

取三叶苷对照品和三叶苷纯品各适量，分别加甲醇 溶解制成对照品溶液和供试品溶液。按 2015 年版《中国 药典( 四部) 》TLC 法试验，吸取上述 2 种溶液各 10 μL， 分别点于同一硅胶 G 薄层板上，分别以石油醚 － 正丁 醇( 1 ∶ 8，V / V) 、乙酸乙酯 － 正丁醇( 2 ∶ 1，V / V) 、乙酸 乙酯 － 丙酮( 3 ∶ 2，V / V) 为展开剂，展开，取出，晾干，置 日光灯下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色 谱相应位置上显相同颜色的斑点，详见图 1。


3 讨论

三叶苷是木姜叶柯具有降糖活性的主要成分，对α － 葡萄糖苷酶有明显抑制作用，与阿卡波糖效果相 当。现有关于木姜叶柯中三叶苷提取、分离报道较 少，且大多采用乙醇水溶液进行提取。本试验中以 水提取，相对于乙醇更环保。 传统的重结晶溶剂多采用甲醇，毒性很大，在使用 过程中，对人体的神经系统和血液系统影响较大，经消 化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，特别是甲 醇蒸气对呼吸道黏膜和视力损伤很大。本试验中采用乙 醇进行热饱和结晶，得到三叶苷的纯度高，污染小，水分 量小，经碳谱、氢谱、薄层色谱鉴定均为正品。



 

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