GZX-9070MBE使用-穿山龙中薯蓣皂苷元比较

穿山龙收载于 2015 年版 《中国药典》一部， 为薯蓣科植物穿龙薯蓣 Dioscorea nipponica Makino 的干燥根茎，于春、秋二季采挖，洗净，除去须根 和外皮，晒干，具有祛风除湿、舒筋通络、活血止 痛、止咳平喘等功效。江慧等优化了穿山龙 中薯蓣皂苷的酶提取工艺，然而穿龙薯蓣中甾体皂 苷的种类较多，以这些皂苷类为指标进行质量 控制时需要多个对照品，且分析条件复杂，不利于 开展日常检测工作。

1 材料

AE240 电子分析天平 ( 万分之一，瑞士梅特 勒-托利多公司) ; Alpha 1-2LD 冷冻干燥机 ( 德国 Christ 公司) ; HH-4 数显恒温水浴锅 ( 国华电器有 限公司) ; ＲE-52A 旋转蒸发仪 ( 上海亚荣生化仪 器厂) ; GSH-0. 5 加压反应釜 ( 内胆 PTFE 覆膜， 威海坤昌化工有限公司) ; ＲHP-800 型高速多功能 粉碎机 ( 浙江永康荣浩工贸有限公司) ; 20AVp HPLC 系统 ( 日本岛津公司) ; N2000 SP1 色谱工 作站 ( 浙江大学智达信息工程有限公司) 。薯蓣皂苷元对照品购自中国食品药品检定研究院 ( 批号 111539-200001) 。超纯水 ( 力康生物医疗科技控股 有限公司) ; 乙腈为色谱纯 ( 美国欧姆尼公司) ; 其他试剂 均 为 分 析 纯 ( 国药集团化学试剂有限公司) 。 穿山龙于 2017 年 11 月至 2018 年 4 月采自黑 龙江伊春、黑龙江尚志、吉林桦甸、吉林通化、吉 林白山、辽宁葫芦岛、陕西宝鸡、河南洛阳、山东 泰安和江苏镇江，并经江苏大学药学院生药学研究 所陈钧教授鉴定为穿龙薯蓣 Dioscorea nipponica Makino 的根茎。药材经冷冻干燥、粉碎后过 40 目 筛，收集细粉，置于电热鼓风干燥箱（博迅GZX-9070MBE电热鼓风干燥箱）中保存。

2 方法与结果

沃特世 Sunfire ＲP18柱 ( 150 mm× 4. 6 mm，5 μm) ; 流动相乙腈-水 ( 88 ∶ 12) ; 体积 流量1. 0 mL /min; 柱温 30 ℃ ; 检测波长 203 nm; 进样量 20 μL; 分析时间 15 min。精 密 称 取 薯 蓣 皂 苷 元 14. 00 mg，无水乙醇溶解并定容至 10 mL，得到质 量浓度为 1 400 μg /mL 的对照品贮备液，无水乙醇 2 倍 稀 释，依 次 得 到 质 量 浓 度 为 700. 0、350. 0、 175. 0、97. 50、43. 75、21. 88、10. 94 μg /mL 的对 照品溶液，并用 0. 22 μm 针头式微孔滤器过滤， 弃去初滤液，收集续滤液，即得。精密称 取穿山龙粉末 8. 00 g，按 1 ∶ 4 比例与细沙混合并 装填于不锈钢色谱柱中，加入 50%乙醇 160 mL 于 80 ℃下加压萃取 4 h，收集流出液，减压回收至无 醇味，200 μL 浓硫酸定容至 50 mL，再加入 50 mL 石油醚 ( 90 ～ 120 ℃ ) ，于 150 ℃下加压水解2. 0 h， 持续搅拌 ( 100 r /min) 。分取石油醚层，水洗至中 性，减压回收溶剂至干，残留物以无水乙醇溶解并 定容至 100 mL，用 0. 22 μm 针头式微孔滤器滤过， 弃去初滤液，收集续滤液，即得。

3 讨论与结论

在对穿山龙药材的供试品溶液中的薯蓣皂苷元 进行分析时，比较了色谱柱 SunFire ＲP18( 150 mm× 4. 6 mm，5 μm) 、Luna C18 ( 4. 6 mm × 150 mm， 5 μm) 、 Eclipse XDB C18 ( 4. 6 mm × 150 mm， 5 μm) ，发现采用 SunFire ＲP18色谱柱时，薯蓣皂 苷元大约在 10 min 出峰，时间适中，色谱峰的对 称性好，并且与其他成分实现了基线分离。 在以传统技术制备穿山龙供试品溶液的过程中，常用索氏抽提法、直接酸水解法，存在耗时 长、硫酸浓度高、测定含有量偏低等不足。本研究 采用了加压液体萃取法和加压两相酸水解法，在加 压条件下，前者可以使穿山龙中的总甾体皂苷被快速、彻底地萃取出来; 后者则只需要使用低浓度硫 酸，并且水解时间大为缩短，有利于保护薯蓣皂苷 元的化学结构，从而使含有量得以提高，并有 利于环境保护，提高制备效率。



 

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