采用 CdTe 量子点偶联志贺氏菌抗体作为 荧光标记,制备一种用于能快速可视化检测志贺氏菌 的免疫荧光试纸条,该试纸条可实现对肉品中志贺氏菌的快速、简便、可视化定量检测。JEM-2100 高分辨率透射电子显微镜:日本电子 株式会社;F-2500 FL 荧光光谱仪:日本 Hitachi 公司; pHS-3C 酸度计:上海雷磁公司;HM3230 点膜仪、 ZQ2002 自动切条仪:上海金标生物科技有限公司; WI95549 冷冻干燥仪:东西仪(北京)科技有限公司; GZX-9240MBE 电热恒温干燥箱:上海博迅实业有限公司。
在硝酸纤维膜上用 HM3230 点膜仪喷涂志贺氏 菌鼠抗和羊抗鼠二抗形成检测带和质控带,将量子点 标记好的志贺氏菌抗体均匀地喷涂在样品垫上,将样 品垫、硝酸纤维膜和吸水垫依次组装,用试纸条切刀 切割成试纸条,干燥箱干燥后封装,避光保存于 4 ℃ 备用。将志贺氏菌菌 悬 液 10 倍梯度稀释制备的 1× 102 CFU/mL~1×108 CFU/mL 志贺氏菌菌液分别滴加到 试纸条加样孔中,反应 5 min,待免疫反应达到平衡后, 在紫外灯下观察质控线和检测线,每个样本重复测定 6 次。结果判定:目视 T 带的荧光强度,与空白对照,荧 光越弱,代表待测溶液中含被测物的浓度越低,出现 荧光的最低浓度即为最低检测限。试验显示制备的荧光免疫层析试纸条与其它致 病菌均无交叉反应,表明制备的试纸条特异性较好。