博迅隔水箱用于胞菌的分离鉴定

材料与方法

血琼脂、ＲＳ琼脂培养基均购自上 海生工生物科技有限公司；光学显微镜购自上海光 学仪器厂；隔水式恒温培养箱购自上海博迅医疗生 物仪器股份有限公司；ＰＣＲ 扩 增 仪 购 自 德 国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司；电泳仪购自北京六一仪器厂；凝胶 成像仪购自 美 国 Ｋｏｄａｋ 公 司；ＡＴＢ 自 动 化 微 生 物 鉴定系统购自法国梅里埃公司。在无菌条件下，用７５％ 酒精对草龟体表消毒，并对草龟进行体表检查。进 一步对草龟 解 剖，打 开 腹 板 后 观 察 脏 器 病 变 情 况。 采取腹水、肝 组 织 病 料，分 别 接 种 于 血 琼 脂、ＲＳ 琼 脂培养基中，置３０ ℃恒温培养箱培养１６～２４ｈ， 观察单菌落生长情况。选取优势菌落再次划线接种 进行纯化培养，然后做革兰染色，待干后镜检。

结 果

以分离 菌 株 ＣＬＷ－１提 取 的 基 因 组 ＤＮＡ 作 为 ＰＣＲ模板进行扩增，结果所示，１６ＳｒＤＮＡ 扩增条带 大小为１４０６ｂｐ，与 片 段 预 期 大 小 一 致。将 扩增出的 片 段 构 建 到 ｐＭＤ１８－Ｔ 载 体 上，由 上 海 生 工生物科技有限公司测序，将测序结果在 ＮＣＢＩ中进 行ＢＬＡＳＴ对比分析，结果显示，分离菌株 ＣＬＷ－１在 遗传进化树中与维氏气单胞菌为同一簇，且与维氏 气单胞菌（ＫＰ１６１８７３．１）相似性为１００％。表 明分离菌株 ＣＬＷ－１为维氏气单胞菌。药敏试验 结 果 表 明，分 离 菌 株 ＣＬＷ－１ 具 有 多 重耐 药 性：分 离 菌 株 ＣＬＷ－１ 对 哌 拉 西 林、头 孢 唑 林、恩诺沙星、头孢哌酮、头孢曲松、环丙沙星、氧氟 沙星、氯霉素、头孢呋辛敏感，那么在临床实践中可 以结合这几种药物治疗水生动物的维氏气单胞菌 病；对呋喃唑酮、苯唑西林、红霉素、米诺环素、丁胺 卡那、庆大霉素、复方新诺明、多西环素、新霉素、卡 那霉素、头孢氨苄、四环素中敏，在治疗过程中轮换 联合用药，协助治疗此菌的感染；对麦迪霉素、克林 霉素、万古霉素、多 黏 菌 素 Ｂ、羧 苄 西 林、氨 苄 西 林、 头孢拉定、诺氟沙星、青霉素耐药。

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