水浴锅用于芋头多酚氧化酶分离。

    芋头（Colocasia esculenta (L.) S.chott）属于块茎植物，富含淀粉、酚类化合物、蛋白质、多糖、维生 素和多种矿物质，具有健脾消食、预防龋齿、降低 胆固醇水平、提高机体免疫力、改善便秘等诸多生理功能。近年来，鲜切是食品工业重要加工方式之一。超滤离心管（10 kDa） 德国Millipore公司； AKTA蛋白质层析纯化系统 美国General Elecric公司； DEAE-Sepharose Fast Flow（DEAE-SFF）层析柱 英国 Waterman公司；Superdex G-75凝胶柱 瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司；CR22N/21N冷冻离心机 日本 日立公司；UV-5500紫外-可见分光光度计 上海元析 仪器有限公司；GJ-18S冷冻干燥机 北京松源华兴科 技发展公司；低温冰箱（－80 ℃） 日本Sanyo公司； WH-600-LCD型电泳仪 北京市六一仪器厂；HHS11-1型数 显式电热恒温水浴锅 上海博迅实业有限公司医疗设 备厂；Biodoc-IT 220普通凝胶成像系统 Analytik Jena 美国有限责任合伙公司；iMark全自动酶标仪 美国 Bio-Rad公司；BL35A11多功能料理机 中国美的集团股 份有限公司；XHF-D匀浆机 宁波新芝生物科技股份有限 公司；101FA-2电热鼓风干燥箱 上海一恒科学仪器有限 公司；Delta 320 pH计 瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司。

    利用DEAE-SFF柱将超滤处理后的粗酶液进行分离 纯化。将超纯水、1 mol/L NaCl溶液、0.1 mol/L磷酸盐缓 冲溶液（pH 6.8）、体积分数20%的乙醇溶液过0.22 μm 膜备用。先利用过膜的超纯水清洗系统和DEAE-SFF层析 柱，再使用0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH 6.8）清洗系统 和平衡柱子。超滤后样品经过0.22 μm膜过滤后上样，洗 脱流速为1.0 mL/min，收集速度5 mL/管，并按收集顺序 从标记管号，测定所收集各峰组分的PPO活性和蛋白质 浓度。用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液将PPO活性测定体系的pH 值范围调整到4.0～8.0之间，并按照0.4的pH值衡量单位 以确定PPO的最适反应pH值。以邻苯二酚溶液为底物， 待邻苯二酚溶液在指定pH值（pH 4～8）平衡后，迅速加 入PPO，测定其420 nm的吸光度，后续实验均采用最佳 pH值。