超声细胞破碎材料与方法

１．１材料与试剂黑桑葚干：新疆和田市丝路果果特产；石油醚（沸程３０～６０℃）、三氯甲烷、正丁醇、９５％乙醇：分析纯，天津市德恩化学试剂有限公司。

１．２仪器与设备超声波细胞破碎仪：ＴＬ－ＳＴ４００型，江苏天翎仪器有限公司；高速多功能粉碎机：ＲＨＰ－２０００Ａ型，天津荣浩机电设备有限公司；数显恒温水浴锅：ＨＨ－４型，上海树立仪器仪表有限公司；高速离心机：ＴＣＬ－１６型，常州金坛良友仪器有限公司；粗脂肪测定仪：ＳＺＦ－０６Ａ型，上海洪纪仪器设备有限公司；电热鼓风干燥箱：ＤＧＨ－９１４０Ａ型，上海一恒科学仪器有限公司。

１．３方法

１．３．１桑葚样品处理将桑葚干样品烘干至恒重，粉碎，过７０目筛后密封保存备用。１．３．２脱脂参照ＧＢ５００９．６—２０１６并修改。称取处理好的桑葚样品４．０００ｇ，水浴温度７０℃回流抽提４ｈ，控制每分钟８０滴左右。脱脂后滤掉废液得桑葚样品。１．３．３细胞破碎仪辅助热水浸提桑葚多糖称取脱脂后的桑葚样品１．０００ｇ，按料液比１:３０（ｇ／ｍＬ）加入蒸馏水，６５℃恒温水浴锅中用细胞破碎仪辅助浸提，将超声波细胞破碎仪变幅杆末端插入液面８ｍｍ并使其位于容器中心位置。变幅杆转换开关打到Φ６，设置超声时间１．２ｓ，间歇时间１．５ｓ，用纱布过滤混合物，３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，收集上清液，６５℃水浴浓缩至液体体积为１０ｍＬ。

１．３．４桑葚多糖的脱蛋白根据文献稍作修改：将浓缩后的桑葚样品置于分液漏斗中，按体积比１:２加入Ｓｅｖａｇ试剂（Ｖ三氯甲烷:Ｖ正丁醇＝４:１），充分摇匀，静置，待分液漏斗中液体分层完毕后，除去底层的有机溶剂及中间层的蛋白质，收集上层液，３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，除去残留蛋白质，收集上清液备用。１．３．５桑葚多糖的制备向脱蛋白后的上清液中加入４倍体积９５％乙醇，混匀静置片刻后沉淀析出，３５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清，将沉淀放置于蒸发皿中，６５℃干燥１．５ｈ，即为桑葚多糖提取物。